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章 CRISPR/Cas9技术 1

概述 1

实验1-1 小向导RNA（sgRNA）设计与载体构建 5

实验1-2 重组质粒的转化和单克隆筛选鉴定 14

实验1-3 重组质粒抽提和鉴定 17

实验1-4 细胞转染及阳克隆鉴定 18

实验1-5 基因编辑效率检测 21

实验1-6 逆转录定量PCR（RT-qPCR）检测目标基因表达 24

实验1-7 蛋白质印迹法（Western blotting）检测目标蛋白的表达 28

章 基因转录调控分析 31

概述 31

实验2-1 双萤光素酶报告基因检测 36

实验2-2 染色质免疫沉淀PCR（ChIP-PCR） 40

实验2-3 染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq） 43

实验2-4 靶标的切割和标记（CUT&Tag）实验 44

实验2-5 甲醛辅助鉴定调控元件技术 47

实验2-6 单细胞ATAC-seq 49

实验2-7 重亚硫酸盐全基因组甲基化测序 50

第三章 非编码RNA分析 53

概述 53

实验3-1 长非编码RNA（lncRNA）靶基因预测能分析 59

实验3-2 利用在线工具对某一环状RNA（circRNA行初步分析 66

实验3-3 circRNA的RT-qPCR检测 71

实验3-4 circRNA过表达及验证 74

第四章 单细胞技术 78

概述 78

实验4-1 视网膜单细胞悬液制备 84

第五章 蛋白质-蛋白质相互作用分析 87

概述 87

实验5-1 酵母双杂交 98

实验5-2 拉下（pull-down）实验 101

实验5-3 免疫共沉淀 103

实验5-4 荧光共振能量转移 106

第六章 定点诱变与蛋白质翻译后修饰 108

概述 108

实验6-1 PCR 介导的快速定点诱变 113

实验6-2 蛋白质小分子泛素相关修饰物蛋白（SUMO）化位点鉴定 115

实验6-3 蛋白质泛素化检测——变免疫沉淀法 116

实验6-4 蛋白质泛素化检测——镍NTA 亲和层析法 117

实验6-5 蛋白质泛素化检测——体内TUBEs 法119

实验6-6 蛋白质泛素化检测——体外检测法 1

第七章 基本生物信息在线工具的使用 122

概述 122

实验7-1 GEO 数据下载及差异基因分析 123

实验7-2 利用在线工具对差异基行聚类分析 131

实验7-3 蛋白质相互作用网络的构建和hub基因筛选 132

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